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中华肾病研究电子杂志

中华肾病研究电子杂志 ›› 2022, Vol. 11 ›› Issue (03) : 121 -125. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-3216.2022.03.001

论著

不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响
沈婉君1, 傅博1, 王田田1, 尹智炜2, 洪权1, 张英杰1, 陈仆1,†(), 陈香美1,†()   
  1. 1. 100853　北京，解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部、解放军肾脏病研究所、肾脏疾病国家重点实验室、国家慢性肾病临床医学研究中心、肾脏疾病研究北京市重点实验室
    2. 100853　北京，解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部、解放军肾脏病研究所、肾脏疾病国家重点实验室、国家慢性肾病临床医学研究中心、肾脏疾病研究北京市重点实验室；050017　石家庄，河北医科大学中西医结合学院
  • 收稿日期:2022-03-08 出版日期:2022-06-28
  • 通信作者: 陈仆, 陈香美
  • 基金资助:
    解放军总医院新技术扶持项目(XJS-202102); 科技部国际科技创新合作重点专项(2018YFE0126600)

Effect of different sampling methods on ultrastructure of cultured renal cells

Wanjun Shen1, Bo Fu1, Tiantian Wang1, Zhiwei Yin2, Quan Hong1, Yingjie Zhang1, Pu Chen1,†(), Xiangmei Chen1,†()   

  1. 1. Department of Nephrology, First Medical Center of Chinese PLA General Hospital, Chinese PLA Institute of Nephrology, State Key Laboratory of Kidney Diseases, National Clinical Research Center for Kidney Diseases, Beijing Key Laboratory of Kidney Diseases, Beijing 100853
    2. Department of Nephrology, First Medical Center of Chinese PLA General Hospital, Chinese PLA Institute of Nephrology, State Key Laboratory of Kidney Diseases, National Clinical Research Center for Kidney Diseases, Beijing Key Laboratory of Kidney Diseases, Beijing 100853; College of Integrated Chinese and Western Medicine, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province; China
  • Received:2022-03-08 Published:2022-06-28
  • Corresponding author: Pu Chen, Xiangmei Chen
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引用本文：

沈婉君, 傅博, 王田田, 尹智炜, 洪权, 张英杰, 陈仆, 陈香美. 不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2022, 11(03): 121-125.

Wanjun Shen, Bo Fu, Tiantian Wang, Zhiwei Yin, Quan Hong, Yingjie Zhang, Pu Chen, Xiangmei Chen. Effect of different sampling methods on ultrastructure of cultured renal cells[J/OL]. Chinese Journal of Kidney Disease Investigation(Electronic Edition), 2022, 11(03): 121-125.

目的

研究不同取材方式对透射电镜肾脏培养细胞样品超微结构的影响。

方法

以大鼠肾小球系膜细胞(RMC)和人肾小管上皮细胞株(HK-2)为实验对象，采取5种不同的取材方式，分别为：刮取-离心-固定组、刮取-固定-离心组、固定-刮取-离心组、消化-离心-固定组、消化-固定-离心组。电镜下比较不同取材方式样品细胞超微结构的形态变化。

结果

透射电镜下观察，消化-固定-离心组细胞形态呈圆形或近圆形，超微结构保存良好，易于观察研究；其次为固定-刮取-离心组，细胞呈长梭形，不利于低倍镜下观察，但超微结构保存良好；再次为刮取-固定-离心组，超微结构保存一般；细胞超微结构保存最差的为消化-离心-固定组和刮取-离心-固定组。

结论

消化-固定-离心可能为透射电镜肾脏贴壁培养细胞样本的最佳取材方式。

关键词: 肾脏, 贴壁细胞, 透射电镜, 超微结构, 取材方式
Objective

To study the effect of different sampling methods on the ultrastructure of cultured renal cells for transmission electron microscopy.

Methods

Rat glomerular mesangial cells (RMC) and human renal tubular epithelial cells (HK-2) were used as experimental objects, and 5 different sampling methods were adopted, namely: scraping-centrifugation-fixation group, scraping-fixation-centrifugation group, fixation-scraping-centrifugation group, digestion-centrifugation-fixation group, and digestion-fixation-centrifugation group. The ultrastructure changes were observed under transmission electron microscope.

Results

Under the transmission electron microscope, it was found that the digestion-fixation-centrifugation group showed round or nearly round cells whose ultrastructure was well preserved and easy to observe. The fixation-scraping-centrifugation group showed long spindle-shaped cells which were not suitable for observation under low magnification, but their ultrastructure was well preserved. The scraping-fixation-centrifugation group showed that their ultrastructural preservation was average. The worst ultrastructure preservation were shown by both the digestion-centrifugation-fixing group and the scraping-centrifugation-fixing group.

Conclusion

The digestion-fixation-centrifugation sampling method may be the best way to obtain renal cultured adherent cells for the transmission electron microscope.

Key words: Kidney, Adherent cells, Transmission electron microscope, Ultrastructure, Sampling method
图1 低倍电镜观察RMC细胞整体形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色，×4 000)注：A：消化-固定-离心组，可见细胞呈圆形或卵圆形、细胞基质均匀深染；B：固定-刮取-离心组，可见细胞呈梭形、细胞基质均匀深染；C：刮取-固定-离心组，可见细胞呈圆形或卵圆形、细胞基质颜色较浅；D：消化-离心-固定组，可见细胞呈不规则圆形、细胞基质淡染；E：刮取-离心-固定组，可见细胞呈不规则圆形、可见细胞碎片，细胞基质淡染
图2 高倍电镜观察RMC细胞超微结构形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色)注：A、F：消化-固定-离心组，可见细胞超微结构保存良好、细胞器形态完整清晰；B、G：固定-刮取-离心组，可见细胞器未见损伤、但因细胞梭形不便于观察；C、H：刮取-固定-离心组，可见部分细胞器受损、结构形态不清晰；D、I：消化-离心-固定组，可见细胞器受损、仅可观察轮廓；E、J：刮取-离心-固定组，可见细胞器破损呈碎片状；A~E：×12 000；F~J：×25 000
图3 低倍电镜观察HK-2细胞整体形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色，×4 000)注：A：消化-固定-离心组，可见细胞呈卵圆形、细胞基质均匀深染；B：固定-刮取-离心组，可见细胞呈梭形、细胞基质均匀深染；C：刮取-固定-离心组，可见细胞呈卵圆形、细胞基质染色不均匀；D：消化-离心-固定组，可见细胞呈卵圆形、细胞核与细胞基质淡染；E：刮取-离心-固定组，可见细胞呈卵圆形、细胞核与细胞基质溶解
图4 高倍电镜观察HK-2细胞超微结构形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色)注：A、F：消化-固定-离心组，可见细胞超微结构保存良好、细胞器形态完整清晰；B、G：固定-刮取-离心组，可见细胞器未见损伤、但因细胞梭形不便于观察；C、H：刮取-固定-离心组，可见细胞器保存尚可、细胞基质有溶解；D、I：消化-离心-固定组，可见细胞核染色质和细胞基质溶解明显、细胞器受损；E、J：刮取-离心-固定组，可见细胞核溶解、细胞器结构破坏碎裂；A~E：×8 000；F~J：×25 000
[1]
Herrera GA. The value of ultrastructural evaluation in medical renal diseases [J]. Ultrastruct Pathol, 2019, 43(6): 225-228.
[2]
周晨明，朱艳，孟丽，等. 透射电镜样品取材和固定应注意的若干问题 [J]. 医学理论与实践，2020, 33(14): 2416，2412.
[3]
Ryan MJ, Johnson G, Kirk J, et al. HK-2: an immortalized proximal tubule epithelial cell line from normal adult human kidney [J]. Kidney Int, 1994, 45(1): 48-57.
[4]
Hornigold N, Craven RA, Keen JN, et al. Upregulation of Hic-5 in glomerulosclerosis and its regulation of mesangial cell apoptosis [J]. Kidney Int, 2010, 77(4): 329-338.
[5]
Peng CC, Chen CR, Chen CY, et al. Bicalutamide may enhance kidney injury in diabetes by concomitantly damaging energy production from OXPHOS and glycolysis [J]. Chem Biol Interact, 2022, 356: 109858.
[6]
陈彦儒，王立言，郝晶，等. 离心沉淀法制备细胞透射电镜样品的技术改进 [J]. 解剖学杂志，2021, 44(2): 159-161.
[7]
翟楠，吴轶成，陈新宇，等. 少量贴壁培养细胞电镜原位包埋方法的探讨 [J]. 中国细胞生物学学报，2014, 36(12): 1649-1651.
[8]
刘琛，李兴航，孟子延，等. 胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究 [J]. 国际生物制品学杂志，2021, 44(3): 158-162.
[1] 杨柳, 陈佳, 孙雅娟, 陈娇, 谭明超, 龚明福. 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎的胸部CT 及临床特征分析[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2024, 17(05): 744-749.
[2] 中华医学会器官移植学分会, 中国医师协会器官移植医师分会. 中国肝移植受者肾损伤管理临床实践指南（2023版）[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2024, 13(03): 276-288.
[3] 周学锋, 董哲毅, 冯哲, 蔡广研, 陈香美. 糖尿病肾脏疾病中西医结合诊疗指南计划书[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(06): 301-305.
[4] 程柏凯, 杨光. 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术评估慢性肾脏病患者胰岛素抵抗的研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(06): 334-339.
[5] 崔文鹏. 腹膜透析在老年终末期肾脏疾病患者中的应用[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 300-300.
[6] 王小龙, 吴杰, 冯哲, 文浩, 段姝伟, 梁爽, 蔡广研. 心内科病房急性肾损伤且行肾脏替代治疗患者短期预后不良的危险因素分析[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 241-248.
[7] 冯熔熔, 苏晓乐, 王利华. 慢性肾脏病患者并发心血管疾病相关生物标志物研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 273-278.
[8] 郭俊楠, 林惠, 任艺林, 乔晞. 氨基酸代谢异常在急性肾损伤向慢性肾脏病转变中的作用研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 283-287.
[9] 涂晓文. 糖尿病肾脏病的靶点药物研发进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(04): 240-240.
[10] 刘俊, 陈客宏. 终末期肾脏病患者运动干预的作用研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(04): 219-225.
[11] 邱英鹏, 李欣雨, 邱海波, 刘松桥, 张凌, 于湘友, 秦秉玉, 蒲莹莹, 赵佳钰, 刘永军, 肖月, 杨毅. 连续性肾脏替代治疗质量控制指标体系的建立及验证[J/OL]. 中华重症医学电子杂志, 2024, 10(04): 351-357.
[12] 向阳, 史黎炜, 肖月, 邱海波, 杨毅, 刘松桥, 邱英鹏, 张莹. 连续性肾脏替代治疗在我国五地区重症医学科的效率分析[J/OL]. 中华重症医学电子杂志, 2024, 10(04): 358-363.
[13] 赵佳钰, 邱英鹏, 刘松桥, 杨毅, 张凌, 于湘友, 秦秉玉, 邱海波, 史黎炜, 刘克军, 蒲莹莹, 陈子扬, 赵羽西, 刘永军, 肖月. 连续性肾脏替代治疗在我国五地区重症医学科的应用现况[J/OL]. 中华重症医学电子杂志, 2024, 10(04): 364-374.
[14] 孙双权, 孙玮玮, 王勇, 方道成, 温晖. 肾脏混合性上皮和间质肿瘤一例[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(05): 512-515.
[15] 奚培培, 周加军. 慢性肾脏病患者肌少症机制和诊治的研究进展[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(05): 491-495.
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