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中华肾病研究电子杂志

中华肾病研究电子杂志 ›› 2022, Vol. 11 ›› Issue (03) : 121 -125. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-3216.2022.03.001

论著

不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响
沈婉君1, 傅博1, 王田田1, 尹智炜2, 洪权1, 张英杰1, 陈仆1,†(), 陈香美1,†()   
  1. 1. 100853　北京，解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部、解放军肾脏病研究所、肾脏疾病国家重点实验室、国家慢性肾病临床医学研究中心、肾脏疾病研究北京市重点实验室
    2. 100853　北京，解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部、解放军肾脏病研究所、肾脏疾病国家重点实验室、国家慢性肾病临床医学研究中心、肾脏疾病研究北京市重点实验室；050017　石家庄，河北医科大学中西医结合学院
  • 收稿日期:2022-03-08 出版日期:2022-06-28
  • 通信作者: 陈仆, 陈香美
  • 基金资助:
    解放军总医院新技术扶持项目(XJS-202102); 科技部国际科技创新合作重点专项(2018YFE0126600)

Effect of different sampling methods on ultrastructure of cultured renal cells

Wanjun Shen1, Bo Fu1, Tiantian Wang1, Zhiwei Yin2, Quan Hong1, Yingjie Zhang1, Pu Chen1,†(), Xiangmei Chen1,†()   

  1. 1. Department of Nephrology, First Medical Center of Chinese PLA General Hospital, Chinese PLA Institute of Nephrology, State Key Laboratory of Kidney Diseases, National Clinical Research Center for Kidney Diseases, Beijing Key Laboratory of Kidney Diseases, Beijing 100853
    2. Department of Nephrology, First Medical Center of Chinese PLA General Hospital, Chinese PLA Institute of Nephrology, State Key Laboratory of Kidney Diseases, National Clinical Research Center for Kidney Diseases, Beijing Key Laboratory of Kidney Diseases, Beijing 100853; College of Integrated Chinese and Western Medicine, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province; China
  • Received:2022-03-08 Published:2022-06-28
  • Corresponding author: Pu Chen, Xiangmei Chen
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引用本文：

沈婉君, 傅博, 王田田, 尹智炜, 洪权, 张英杰, 陈仆, 陈香美. 不同取材方式对肾脏培养细胞样品超微结构的影响[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2022, 11(03): 121-125.

Wanjun Shen, Bo Fu, Tiantian Wang, Zhiwei Yin, Quan Hong, Yingjie Zhang, Pu Chen, Xiangmei Chen. Effect of different sampling methods on ultrastructure of cultured renal cells[J]. Chinese Journal of Kidney Disease Investigation(Electronic Edition), 2022, 11(03): 121-125.

目的

研究不同取材方式对透射电镜肾脏培养细胞样品超微结构的影响。

方法

以大鼠肾小球系膜细胞(RMC)和人肾小管上皮细胞株(HK-2)为实验对象，采取5种不同的取材方式，分别为：刮取-离心-固定组、刮取-固定-离心组、固定-刮取-离心组、消化-离心-固定组、消化-固定-离心组。电镜下比较不同取材方式样品细胞超微结构的形态变化。

结果

透射电镜下观察，消化-固定-离心组细胞形态呈圆形或近圆形，超微结构保存良好，易于观察研究；其次为固定-刮取-离心组，细胞呈长梭形，不利于低倍镜下观察，但超微结构保存良好；再次为刮取-固定-离心组，超微结构保存一般；细胞超微结构保存最差的为消化-离心-固定组和刮取-离心-固定组。

结论

消化-固定-离心可能为透射电镜肾脏贴壁培养细胞样本的最佳取材方式。

关键词: 肾脏, 贴壁细胞, 透射电镜, 超微结构, 取材方式
Objective

To study the effect of different sampling methods on the ultrastructure of cultured renal cells for transmission electron microscopy.

Methods

Rat glomerular mesangial cells (RMC) and human renal tubular epithelial cells (HK-2) were used as experimental objects, and 5 different sampling methods were adopted, namely: scraping-centrifugation-fixation group, scraping-fixation-centrifugation group, fixation-scraping-centrifugation group, digestion-centrifugation-fixation group, and digestion-fixation-centrifugation group. The ultrastructure changes were observed under transmission electron microscope.

Results

Under the transmission electron microscope, it was found that the digestion-fixation-centrifugation group showed round or nearly round cells whose ultrastructure was well preserved and easy to observe. The fixation-scraping-centrifugation group showed long spindle-shaped cells which were not suitable for observation under low magnification, but their ultrastructure was well preserved. The scraping-fixation-centrifugation group showed that their ultrastructural preservation was average. The worst ultrastructure preservation were shown by both the digestion-centrifugation-fixing group and the scraping-centrifugation-fixing group.

Conclusion

The digestion-fixation-centrifugation sampling method may be the best way to obtain renal cultured adherent cells for the transmission electron microscope.

Key words: Kidney, Adherent cells, Transmission electron microscope, Ultrastructure, Sampling method
图1 低倍电镜观察RMC细胞整体形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色，×4 000)注：A：消化-固定-离心组，可见细胞呈圆形或卵圆形、细胞基质均匀深染；B：固定-刮取-离心组，可见细胞呈梭形、细胞基质均匀深染；C：刮取-固定-离心组，可见细胞呈圆形或卵圆形、细胞基质颜色较浅；D：消化-离心-固定组，可见细胞呈不规则圆形、细胞基质淡染；E：刮取-离心-固定组，可见细胞呈不规则圆形、可见细胞碎片，细胞基质淡染
图2 高倍电镜观察RMC细胞超微结构形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色)注：A、F：消化-固定-离心组，可见细胞超微结构保存良好、细胞器形态完整清晰；B、G：固定-刮取-离心组，可见细胞器未见损伤、但因细胞梭形不便于观察；C、H：刮取-固定-离心组，可见部分细胞器受损、结构形态不清晰；D、I：消化-离心-固定组，可见细胞器受损、仅可观察轮廓；E、J：刮取-离心-固定组，可见细胞器破损呈碎片状；A~E：×12 000；F~J：×25 000
图3 低倍电镜观察HK-2细胞整体形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色，×4 000)注：A：消化-固定-离心组，可见细胞呈卵圆形、细胞基质均匀深染；B：固定-刮取-离心组，可见细胞呈梭形、细胞基质均匀深染；C：刮取-固定-离心组，可见细胞呈卵圆形、细胞基质染色不均匀；D：消化-离心-固定组，可见细胞呈卵圆形、细胞核与细胞基质淡染；E：刮取-离心-固定组，可见细胞呈卵圆形、细胞核与细胞基质溶解
图4 高倍电镜观察HK-2细胞超微结构形态(醋酸双氧铀、柠檬酸铅染色)注：A、F：消化-固定-离心组，可见细胞超微结构保存良好、细胞器形态完整清晰；B、G：固定-刮取-离心组，可见细胞器未见损伤、但因细胞梭形不便于观察；C、H：刮取-固定-离心组，可见细胞器保存尚可、细胞基质有溶解；D、I：消化-离心-固定组，可见细胞核染色质和细胞基质溶解明显、细胞器受损；E、J：刮取-离心-固定组，可见细胞核溶解、细胞器结构破坏碎裂；A~E：×8 000；F~J：×25 000
[1]
Herrera GA. The value of ultrastructural evaluation in medical renal diseases [J]. Ultrastruct Pathol, 2019, 43(6): 225-228.
[2]
周晨明，朱艳，孟丽，等. 透射电镜样品取材和固定应注意的若干问题 [J]. 医学理论与实践，2020, 33(14): 2416，2412.
[3]
Ryan MJ, Johnson G, Kirk J, et al. HK-2: an immortalized proximal tubule epithelial cell line from normal adult human kidney [J]. Kidney Int, 1994, 45(1): 48-57.
[4]
Hornigold N, Craven RA, Keen JN, et al. Upregulation of Hic-5 in glomerulosclerosis and its regulation of mesangial cell apoptosis [J]. Kidney Int, 2010, 77(4): 329-338.
[5]
Peng CC, Chen CR, Chen CY, et al. Bicalutamide may enhance kidney injury in diabetes by concomitantly damaging energy production from OXPHOS and glycolysis [J]. Chem Biol Interact, 2022, 356: 109858.
[6]
陈彦儒，王立言，郝晶，等. 离心沉淀法制备细胞透射电镜样品的技术改进 [J]. 解剖学杂志，2021, 44(2): 159-161.
[7]
翟楠，吴轶成，陈新宇，等. 少量贴壁培养细胞电镜原位包埋方法的探讨 [J]. 中国细胞生物学学报，2014, 36(12): 1649-1651.
[8]
刘琛，李兴航，孟子延，等. 胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究 [J]. 国际生物制品学杂志，2021, 44(3): 158-162.
[1] 王丽萍, 徐磊, 蒋天安, 强嘉璘. 微血管成像联合Qpack定量分析技术评估慢性肾脏病患者肾皮质区血流灌注的价值[J]. 中华医学超声杂志（电子版）, 2023, 20(03): 292-296.
[2] 韩圣瑾, 周正武, 翁云龙, 黄鑫. 碳酸氢钠林格液联合连续性肾脏替代疗法对创伤合并急性肾损伤患者炎症水平及肾功能的影响[J]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2023, 16(05): 376-381.
[3] 韩媛媛, 热孜亚·萨贝提, 冒智捷, 穆福娜依·艾尔肯, 陆晨, 桑晓红, 阿尔曼·木拉提, 张丽. 组合式血液净化治疗对脓毒症患者血清炎症因子水平和临床预后的影响[J]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2023, 16(04): 272-278.
[4] 周川鹏, 杨浩, 魏微阳, 王奇, 黄亚强. 微创与标准通道经皮肾镜治疗肾结石合并肾功能不全的对比研究[J]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2023, 17(05): 470-475.
[5] 许磊, 孙杰, 陈先志, 张家泉, 李旺勇, 冯其柱, 王琦. 血液净化治疗在高血脂性重症胰腺炎中的应用[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(04): 464-468.
[6] 杨巧巧, 佟琰, 王宏, 谢大洋, 张玉婷, 张庆涛, 于茜, 赵小淋, 曹雪莹, 周建辉. 人工肾研究：文献计量学分析[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(05): 241-247.
[7] 张妍, 吕强, 韩笑, 王旭, 刘冉, 张利, 陈香美. 挤压综合征大鼠核心脏器肾心肺损伤特点研究[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(05): 248-253.
[8] 程庆砾. 新冠病毒感染与肾脏[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(04): 240-240.
[9] 张艳如, 苏晓乐, 王利华. 丝氨酸蛋白酶Corin与肾脏疾病的关系研究进展[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(04): 220-223.
[10] 李思佳, 苏晓乐, 王利华. 通过抑制Wnt/β-catenin信号通路延缓肾间质纤维化研究进展[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(04): 224-228.
[11] 杨长沅, 凌曦淘, 丘伽美, 段若兰, 李琴, 林玉婕, 秦新东, 侯海晶, 卢富华, 苏国彬. 慢性肾脏病患者衰弱的筛查/评估工具研究进展[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(04): 229-233.
[12] 金艳盛, 董改琴, 李晓忠. 巨噬细胞在慢性肾脏病患者血管钙化中的作用与机制研究进展[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(04): 234-237.
[13] 于天宇, 杨悦, 陆海涛, 田志永, 李文歌. 高龄急性肾损伤患者连续性肾脏替代治疗的预后及影响因素[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(03): 134-138.
[14] 王诗远, 张爱华. 慢性肾脏病相关认知障碍的发生机制研究进展[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2023, 12(03): 163-167.
[15] 易成, 韦伟, 赵宇亮. 急性肾脏病的概念沿革[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(08): 906-910.
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