益肾化湿颗粒对慢性肾衰竭大鼠肾组织转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-3216.2024.03.006

目的

探讨益肾化湿颗粒对慢性肾衰竭大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。

方法

60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、氯沙坦组、益肾化湿颗粒低剂量组和益肾化湿颗粒高剂量组。除对照组外，各组大鼠以腺嘌呤200 mg/(kg·d)灌胃建立慢性肾衰竭动物模型。造模成功后，对照组及模型组给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃，氯沙坦组给予氯沙坦混悬液10 ml/(kg·d)灌胃，益肾化湿颗粒低剂量组和高剂量组分别给予益肾化湿颗粒混悬液2.5 g/(kg·d)、5.0 g/(kg·d)灌胃。连续给药8周后，逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和Western印迹法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA的mRNA及蛋白表达，Masson染色观察肾组织病理变化。

结果

与对照组比较，模型组TGF-β1和α-SMA的mRNA及蛋白表达显著增加(P均<0.01)；与模型组比较，各治疗组TGF-β1和α-SMA的mRNA及蛋白表达均有下降(P均<0.05)。各治疗组组间比较，高剂量组、氯沙坦组TGF-β1和α-SMA的mRNA及蛋白表达低于低剂量组(P均<0.05)。Masson染色显示，各治疗组的胶原沉积均有减少。

结论

益肾化湿颗粒能够减轻腺嘌呤诱导慢性肾衰竭大鼠肾脏TGF-β1和α-SMA的mRNA及蛋白表达，提示其可能具有潜在的改善慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化的作用。

关键词: 益肾化湿颗粒, 肾间质纤维化, 转化生长因子-β1, α-平滑肌肌动蛋白

Objective

To investigate the effect of Yishen Huashi granules on the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and α-smooth muscle actin (α-SMA) in the kidneys of rats with chronic renal failure.

Methods

Sixty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group, model group, losartan group, low-dose group, and high-dose group. Except the control group, the other groups of rats were given adenine 200 mg/(kg·d) through gavage to establish the animal model of chronic renal failure. After the modeling was successful, the control group and model group were given 10 ml/(kg·d) of normal saline by gavage, while the losartan group was given 10 ml/(kg·d) of losartan suspension by gavage, and the low-dose group and high-dose group were given 2.5 g/(kg·d) and 5.0 g/(kg·d) of Yishen Huashi granules suspension by gavage, respectively. After 8 weeks of the above treatment, the mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA in renal tissues were detected by RT-PCR and Western blotting, and the pathological changes were observed after Masson staining.

Results

Compared with the control group, the model group showed significant increases of the mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA (P<0.01). Compared with model group, all the three treatment groups showed decreases of the mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA (P<0.05). The mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA of the high-dose group and losartan group were lower than those in the low-dose group (all P<0.05). Masson staining showed that collagen deposition was reduced in all the three treatment groups.

Conclusion

Yishen Huashi granules could reduce the renal mRNA and protein expression of TGF-β1 and α-SMA in rats with chronic renal failure induced by adenine, suggesting that it might have a potential effect on improving renal interstitial fibrosis in rats with chronic renal failure.

Key words: Yishen Huashi granules, Renal interstitial fibrosis, Transforming growth factor-β1, α-smooth muscle actin

表1 大鼠TGF-β1和α-SMA等引物设计

基因	引物序列	产物(bp)
TGF-β1	上游：5′- GCT AAT GGT GGA CCG CAA C-3′	212
	下游：5′- CAG TGA GCA CTG AAG CGA-3′
α-SMA	上游：5′ -CTGTCCAGAAGCCGAAACTCTTGA -3′	585
	下游：5′ -GTTGTGTGCATGAGACAGAGAGGA-3′
β-肌动蛋白	上游：5′-GAA ATCGTG CGTGACATTAAG- 3′	490
	下游：5′-CTA GAA GCA TTTGCG GTG GA- 3′

表1 大鼠TGF-β1和α-SMA等引物设计

基因	引物序列	产物(bp)
TGF-β1	上游：5′- GCT AAT GGT GGA CCG CAA C-3′	212
	下游：5′- CAG TGA GCA CTG AAG CGA-3′
α-SMA	上游：5′ -CTGTCCAGAAGCCGAAACTCTTGA -3′	585
	下游：5′ -GTTGTGTGCATGAGACAGAGAGGA-3′
β-肌动蛋白	上游：5′-GAA ATCGTG CGTGACATTAAG- 3′	490
	下游：5′-CTA GAA GCA TTTGCG GTG GA- 3′

图1 大鼠肾组织Masson染色(×200)注：A：对照组；B：模型组；C：益肾化湿颗粒低剂量组；D：益肾化湿颗粒高剂量组；E：氯沙坦组；蓝色染色为沉积的胶原纤维

图2 RT-PCR检测各组大鼠TGF-β1及α-SMA mRNA表达与比较注：β-actin：β-肌动蛋白，作为内参照；与对照组相比，^aP<0.01；与模型组对比，^bP<0.05；与益肾化湿颗粒低剂量组对比，^cP<0.05

图3 Western印迹检测各组大鼠TGF-β1及α-SMA蛋白表达与比较注：β-actin：β-肌动蛋白，作为内参照；注：与对照组相比，^aP<0.01；与模型组对比，^bP<0.05；与益肾化湿颗粒低剂量组对比，^cP<0.05

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